正就读中学的少年迈尔斯(沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音)意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤,随后身体发生奇特的变化 偶然机缘,他目睹了蜘蛛侠(克里斯·派恩 Chris Pine 配音)和犯罪头目金并(列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音)的战斗 为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙,蜘蛛侠最终壮烈牺牲 可未过多久,来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克(杰克·约翰逊 Jake M Johnson 配音)出现在迈尔斯面前 为了阻止金并的阴谋,并帮助这个帕克返回自己的宇宙,他们闯入金并的老巢 在这一过程中,二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击 与此同时,来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现 他们合力与恶势力展开斗争……